卡梅德生物科技（天津）有限公司
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卡梅德生物（KMD?Bioscience）多年來致力于抗體領域研究。我們積累了豐富的抗體文庫構建經驗，能夠為客戶提供基于抗體噬菌體展示文庫技術的single-chain Fv（scFv）抗體文庫構建服務。單鏈抗體（scFv）具有分子量小，組織穿透力強，易于進行基因工程改造等優點?？返律锢每贵w噬菌體展示文庫技術，可以制備得到高親和力，結構穩定的scFv抗體。
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人源scFV抗體庫構建：
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噬菌體展示抗體文庫被廣泛應用于高親和力抗體的篩選工作，如血管生成標志物纖連蛋白，腫瘤特異性B3/B4抗原，EGFR等蛋白特異性高親和力抗體的篩選。通過噬菌體展示技術構建的抗體文庫通常來源于RT-PCR擴增外周血單核細胞，脾細胞，骨髓細胞和扁桃體來源的mRNAs形成cDNA片段，將這些基因片段拼接到噬粒載體，再轉入噬菌體形成共價結構蛋白表達和體外展示?？贵w重鏈和輕鏈獨立自由表達，然后隨機地組合，形成噬菌體克隆數達到1011-1012的龐大抗體庫。
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圖1 噬菌體展示技術
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Single-chain Fv（scFv）抗體文庫是指將抗體的可變區（VH和VL）基因，尤其是CDR區域（互補決定區）采用不同的策略和方式，如氨基酸突變，移碼讀框等形成數目龐大的不同克隆，并從這些克隆中篩選出針對目的抗原的高親和力單鏈Fv抗體。研究表明，抗體可變區的CDR3的多樣性直接決定了抗原特異性和結合親和力，并且CDR3-FR（frame region）組合的多樣性決定了抗體經歷何種方式的親和成熟過程。
我們采用錯誤傾向性PCR，巢式PCR等技術構建達到108-109CFU庫容量的一級文庫。相比Fab?抗體文庫，由于scFv抗體分子量更小，約25kDa，scFV抗體更加穩定，也不容易形成多聚體。
噬菌體宿主體系：
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卡梅德生物科技噬菌體展示平臺擁有M13，T4和T7噬菌體系列，根據客戶的項目需求（展示的蛋白或抗體片段的大小等參數），我們會采用不同的噬菌體系列進行文庫構建。在我們完成的案例中，基于M13噬菌體pIII基因展示體系較為常用，構建的庫容量可以達到1011，其中有效庫容量為109。
同時，客戶也可以提供抗原，我們進行體外外周血淋巴單核細胞敏化，從而獲得更高親和力和特異性的單克隆抗體，通?；谠摲椒ㄖ苽涞目贵w親和力能達到10-13?M級別。
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項目流程：
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步驟 |
服務內容 |
周期 |
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抗體cDNA制備 |
* ?總RNA提取
* ?高保真RT-PCR制備cDNA
* 系統對照：Actin特異引物PCR擴增，以鑒定逆轉錄產品cDNA質量 |
8-9周 |
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構建抗體庫 |
* 引物設計與合成：抗體可變區兼并引物設計、合成
* 以cDNA為模板，PCR擴增抗體重鏈和輕鏈可變區基因
* scFv基因拼接
* 噬粒構建與轉化：酶切、連接scFv和噬菌粒載體，電擊轉化TG1宿主菌，構建抗體庫
* 鑒定：隨機挑選20-50個克隆，PCR鑒定陽性率，測序和分析抗體序列
* 包裝，＞1x1013噬菌體顆粒/ml |
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交付 |
* 構建報告，包括詳細建程序，代表性序列信息 * 產品交付：細菌和噬菌體兩種形式抗體庫 |
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服務優勢：
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--免疫，天然和合成抗體噬菌體文庫構建
--周期短：預制抗體文庫篩選服務
--嚴謹完整的QC標準
--高庫容量：獨立克隆數107-1012
--高通量篩選與靈活，個性化的文庫淘篩策略
--高親和力抗體制備：10-7-10-13
--多種噬菌體展示系統：M13，T4，T7
--完整的上下游服務：提供從抗體制備、抗體測序，抗體標記修飾，到抗體人源化等一站式技術服務，節約客戶寶貴時間和經費
--服務可定制：根據客戶需求制備，為每一個客戶量身定制實驗方案，滿足每一位客戶的特殊需求
技術流程：
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如何訂購？
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