卡梅德生物科技（天津）有限公司
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卡梅德生物（KMD?Bioscience）多年來致力于重組蛋白表達與制備研究。我們擁有經驗豐富的技術團隊，積累了充足的重組抗體和重組蛋白制備經驗，同時具備多種純化體系，為蛋白表達與純化方面提供多種選擇。我們的技術人員可以根據蛋白性質采用不同類型的蛋白純化技術，設計多種蛋白純化實驗方案，能夠為客戶提供高品質的重組蛋白純化服務。
GST融合蛋白是分子生物學領域的基本工具，其廣泛用于蛋白質-DNA及蛋白-蛋白間的相互作用研究?？返律锾峁?/span>GST融合蛋白純化服務，嚴格的控制體系保證交付蛋白的純度和質量。我們擁有不同體積的發酵罐和多元化的重組蛋白純化體系，可以滿足高通量及大規模的重組蛋白表達需求?；?/span>抗體平臺、蛋白平臺等完善的平臺體系建設，我們涵蓋了從基因合成、載體構建到蛋白表達及純化等一站式服務。
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GST融合蛋白純化簡介：
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GST (Glutathione S-transferase)，即谷胱甘肽巰基轉移酶，全長211個氨基酸，分子量為26kDa，廣泛應用于重組蛋白表達以及親和純化實驗中。GST具有高度的親水性，因此也常被用于改善目的蛋白的可溶性。例如某些蛋白進行6′His 融合表達的時候，如果產生的蛋白可溶性較差，可以采用更換質粒載體的方法進行GST融合表達以改進目的蛋白的可溶性。
GST純化系統是利用GST融合蛋白與固定的谷胱甘肽（GSH）通過二硫鍵共價親和，通過GSH交換洗脫的原理進行蛋白純化。GST能夠催化GSH形成GS-GST的復合物。根據這一特點，將GSH交聯到瓊脂糖凝膠顆粒(Beads)上后，利用GST的催化能力形成Bead-GS-GST-protein的復合物從而將目的蛋白從復雜的混合物中純化出來。
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服務內容：
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步驟 |
服務內容 |
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Step 1 |
* 從LB平板上挑取單克隆接種到2ml LB液中(Amp+)，220-250rpm，37℃振蕩培養至OD600值約為0.6 |
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Step 2 |
* 將活化后菌體接種到TB培養基中，測定起始OD600值，37℃振蕩培養，當OD600值增加0.6-1.0單位時，加入IPTG至終濃度10μM繼續搖床培養3-4h |
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Step 3 |
* 4000rpm離心10min收集菌體 |
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Step 4 |
* 5-10倍柱體積的lysis buffer重懸細菌，加入PMSF等蛋白酶抑制劑，超聲400-600瓦破碎細胞 |
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Step 5 |
* 4℃，8000rpm，離心20min取上清過谷胱甘肽瓊脂糖柱 |
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Step 6 |
* 過柱前后，均用5′柱體積的lysis buffer洗層析柱，收集流穿液 |
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Step 7 |
* Elution buffer洗脫，收集洗脫峰前，峰中間和峰后，SDS-PAGE鑒定純度 |
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Step 8 |
* GST標簽移除：凝血酶等酶切后，非變性膠分離純化 |
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服務優勢：
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--適用范圍廣，可在不同宿主中表達
--特異性好，純化方便且溫和
--豐富的經驗積累，成熟的技術路線，保證獲得的純品蛋白可以滿足后續精細實驗要求
--擁有多種重組蛋白表達系統和多種純化體系
--完整的上下游服務：提供從基因合成、載體構建到蛋白表達及純化的一站式服務
--服務可定制：根據客戶需求制備，為客戶提供包括信息咨詢，詳細實驗方案的設計與實施等相關服務
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實驗案例：
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-- 重組GST-VER2純化：Lane 1，未誘導細胞裂解液； Lane 2，IPTG誘導，箭頭所示為目的蛋白； Lane M，markers。
-- 純化VER2 蛋白： Lane 1，純化 GST-VER2重組蛋白； Lane 2，凝血酶消化GST-VER2；Lane 3，純化 VER2；Lane M，markers。
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關于更多GST融合蛋白純化的技術問題，請查看我們的技術資料或者聯系我們的技術支持人員獲得進一步的幫助。
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