卡梅德生物科技（天津）有限公司
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卡梅德生物（KMD?Bioscience）多年來致力于細胞生物學技術研究，在穩定細胞株構建方面積累了豐富的經驗，我們的科學家擁有多年實驗成功案例，熟悉實驗環節中的每一步操作，尤其對關鍵步驟具有獨到的經驗，能夠憑借精湛技術快速完成實驗內容，為客戶節省寶貴的時間和經費。目前我司已成功為眾多科研客戶構建獲得大量目的細胞株。我們構建的細胞系可直接應用于下游的生物學研究，我們建立了完善的細胞實驗服務平臺，提供一體化的工業生產式技術服務，與國內知名研發單位合作推出完備的CRISPR/Cas9載體系統，包括單敲除、雙敲除、缺口酶、慢病毒敲除載體和敲除載體庫等體系，并且每一個載體系統都有不同的標簽（EGFP/RFP/Puro/Neo）可供選擇，能夠為客戶提供快速、準確的基因敲除項目服務?？返律镆劳邢冗M的技術和經驗豐富的科研團隊，可為客戶提供系統的CRISPR/Cas9敲除細胞系構建服務。
CRISPR/Cas9（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）是新出現的一種由sgRNA指導Cas核酸內切酶對靶向基因進行特定DNA修飾的技術。CRISPR/Cas9系統廣泛存在于原核生物基因中，是細菌和古細菌為應對病毒和質粒不斷攻擊而演化來的一種適應性免疫防御機制。在這些生物體中，來自噬菌體的外源遺傳物質獲得和整合入CRISPR位點。這些序列特異的片段被轉錄成短CRISPR的RNA（CRISPR-derivedRNA），crRNA通過堿基配對與tracrRNA（trans-activating RNA）結合形成雙鏈RNA，然后tracrRNA/crRNA復合體指導Cas9蛋白切斷雙鏈DNA。隨著CRISPR/Cas9技術的不斷發展，該技術已廣泛應用在各物種中，是目前普遍使用的基因編輯技術。
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CRISPR/Cas9系統技術：
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CRISPR/Cas9技術 |
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實驗原理 |
* 該技術的工作原理是：噬菌體等外源DNA入侵時，Cas蛋白復合物通常識別 3' 端含NGG的前間隔序列鄰近基序 (PAM) 區域。然后，侵入的噬菌體或質粒釋放的短DNA片段，插入宿主 CRISPR 位點中。在II型CRISPR系統中，CRISPR RNA（crRNA）通過堿基配對與轉錄激活crRNA（Trans-activating crRNA，tracrRNA）退火形成能夠特異識別基因組序列的復合體，然后通過PAM（5’-NGG-3’）序列結合并侵入DNA，引導Cas9核酸內切酶在目的片段生成DNA雙鏈斷裂（double-strand breaks，DSBs）。?這個識別復合體可以通過融合crRNA與tracrRNA序列形成sgRNA（single-guided RNA）進行簡化。融合的RNA具有與野生型RNA類似的活力，但由于結構得到了簡化，更方便研究者使用。通過電刺激轉染的方法直接將Cas9蛋白和sgRNA復合物轉染到細胞中，便能夠對目的基因進行操作。 |
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優點 |
* 具有編輯效率高、構建簡單、操作方便等優點
* 使用更加嚴苛的篩選標準，可以更有效地去除假陽性
* 能夠成本低廉地實現有效靈活的基因敲除
* 具有廣譜性，無基因、細胞及物種限制
* 可實現多個靶位點同時進行基因打靶
* 功能豐富，可實現敲除、插入、抑制、激活等多種目的基因 |
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圖1：CRISPR/Cas9介導的基因組編輯原理圖
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項目流程：
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服務優勢：
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--效率高、系統穩、脫靶低、性價比高，服務透明化
--可對同一細胞進行多個基因敲除實驗
--提供多種不同熒光和抗性標記的表達載體，更易篩選到基因敲除成功的細胞
--嚴格的質控體系，豐富的成功經驗
--具備完善的細胞、蛋白等服務平臺，能夠提供從sgRNA設計到蛋白檢測等一站式技術服務
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如何訂購？
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