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卡梅德生物長期以來一直專注于優化我們的質譜技術平臺。我們開發了一條完整的蛋白質鑒定流程,從樣品制備、蛋白質分離純化、質量分析,最后到系統的生物信息學分析。
糖基化主要是指將聚糖附著在蛋白質、脂質或其他有機分子上的酶促過程。它是比較常見的蛋白質翻譯后修飾(PTM)。由于附著聚糖的復雜性和同量異位性質,糖基化分析具有挑戰性。隨著單克隆抗體、糖蛋白、激素、細胞因子和凝血因子等蛋白質治療藥物在臨床實踐中的應用越來越多,常規監測蛋白質的N-糖基化越來越受歡迎。
N-聚糖是具有 Man3-GlcNAc2 核心的異質天線寡糖結構。它們通過末端 N-乙酰氨基葡萄糖 (GlcNAc) 和天冬酰胺的 NH?2基團之間的糖苷鍵連接到多肽鏈。這組互補分析的目的是闡明目標分子(如蛋白質或肽)的整體 N-聚糖譜。大多數 N-聚糖樣品制備包括一般步驟,包括糖蛋白的消化、去糖基化、純化、標記/衍生化和 SPE。根據樣品的性質,也可以使用額外的步驟和技術選項。
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圖1 N-聚糖分析的一般工作流程
基于 MALDI TOF MS 和 UHPLC 的技術可確定與純化的目標分子或分子混合物相關的整體 N-聚糖群。
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MALDI-TOF MS 的 N-聚糖分析:
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定性基質輔助激光解吸/電離飛行時間質譜 (MALDI-TOF MS) 代表了糖基化化合物結構表征的高靈敏度和穩健性,也可以以高通量方式使用。單電荷離子形成保持 MALDI 能力,而不是電噴霧電離分析 N-聚糖混合物。在全甲基化后分析使用肽 N-糖苷酶 A 或 F 通過酶促去糖基化釋放的 N-聚糖。
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HILIC-UHPLC MS 的 N-糖分析:
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親水相互作用色譜 (HILIC) 一直是 N-聚糖分析的強大技術。因此,由于其被廣泛接受,使用 PNGase F 對酶促聚糖釋放進行糖譜分析,然后通過 HILIC-UHPLC 使用 2-氨基苯甲酰胺 (2-AB) 進行衍生化是一種快速且穩健的技術,可用于分析大量含有眾所周知的 N-聚糖的樣品配置文件。在熒光標記之前,當存在大量可能干擾衍生反應的去污劑、非揮發性鹽或具有游離氨基的材料時,應在 TSK Amide-80 柱上進一步純化收獲的 N-聚糖。然后通過 HILIC 分離組合質譜檢測分析標記的 N-聚糖。
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客戶提供:
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蛋白質 |
至少100ug |
細胞 |
至少1×107個 |
動物組織 |
至少1g |
植物組織 |
至少200mg |
抗凝血 (EDTA) |
至少1ml |
血清 |
血清0.2-0.5ml |
尿液 |
至少2ml |
微生物樣品 |
干重不低于200mg |
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如何訂購?
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