SARS-CoV-2假病毒采用表達新冠病毒刺突蛋白Spike的質粒，能夠表達新冠病毒的Spike刺突蛋白，后與靶細胞的ACE2結合，同時假病毒攜帶便于檢測的綠色熒光蛋白（GFP）報告基因以便檢測感染程度。此高純度病毒在篩選研究阻斷病毒入侵相關的中和抗體藥物、免疫效果評估等眾多科研實驗中都發揮著重要作用。

 假病毒只能單次感染，不能復制產生新的病毒，安全性高，可在P2級和常規實驗室使用。

細胞級SARS-CoV-2假病毒液

參考實驗步驟

1．將高表達hACE2的293T細胞接種在培養板中，接種細胞密度40%左右，37℃，5%CO₂培養箱中過夜培養。
2．感染前1小時更換含polybrene培養基，然后將不同稀釋比的待測樣本（如可能含中和抗體血清樣本，或純的中和抗體或待測藥物）與SARS-CoV-2假病毒混合均勻，37℃作用1h。

細胞實驗假病毒建議用量

3．將步驟2混合物加入到細胞培養基中并混勻，24小時后更換含有抗生素的新鮮培養基。
4．假病毒感染72小時后，測定熒光素酶表達水平（試劑盒另行訂購），根據熒光素酶報告基因表達強度（RLU）計算并確定病毒感染水平。
5．假病毒同時攜帶Puromycin的抗性基因，可以對假病毒感染后的細胞進行抗生素篩選，利用克隆形成率反映病毒感染水平。

細胞級Lenti-hACE2預制病毒液

慢病毒（Lentivirus）顆粒經過特殊純化工藝，滴度大于1E+9GC/ml  可以過表達人ACE2基因（hACE2）。通過感染目的細胞株并篩選獲得高表達hACE2蛋白受體的混合克隆和單克隆細胞株。

 使用方法

1．細胞接種：將目的細胞接種在6孔培養板中，接種密度40%左右，DEME+10%胎牛血清培養基，37℃，5%CO₂孵箱中培養24h，密度達到70-80%。

2．病毒感染：用Lenti-hACE2病毒感染細胞，每孔建議使用量為1-5ul；如使用更大面積的培養板進行病毒感染及ACE2過表達細胞克隆篩選，根據培養板面積計算病毒用量。

3．ACE2過表達細胞克隆篩選：病毒感染48H后，加入抗生素blasticidin篩選并獲得過表達hACE2混合克隆或單克隆細胞株，可通過Western Blot檢測hACE2的表達。

參考實驗步驟

1．將高表達hACE2的293T細胞接種在培養板中，接種細胞密度40%左右，37℃，5%CO₂培養箱中過夜培養。
2．感染前1小時更換含polybrene培養基，然后將不同稀釋比的待測樣本（如可能含中和抗體血清樣本，或純的中和抗體或待測藥物）與SARS-CoV-2假病毒混合均勻，37℃作用1h。

細胞實驗假病毒建議用量

3．將步驟2混合物加入到細胞培養基中并混勻，24小時后更換含有抗生素的新鮮培養基。
4．假病毒感染72小時后，測定熒光素酶表達水平（試劑盒另行訂購），根據熒光素酶報告基因表達強度（RLU）計算并確定病毒感染水平。
5．假病毒同時攜帶Puromycin的抗性基因，可以對假病毒感染后的細胞進行抗生素篩選，利用克隆形成率反映病毒感染水平。

hACE2高表達293T細胞系

制備過程：hACE2高表達293T細胞系是用Lenti-hACE2預制病毒液感染293T細胞，加入抗生素blasticidin篩選后獲得的單克隆293T細胞株。

培養條件：高糖DMEM培養基+10%胎牛血清（推薦使用Gibco公司胎牛血清，貨號10019-141c），37℃，5%CO₂孵箱中培養。

產品用途：與SARS-CoV-2假病毒液配合使用，通過評估假病毒攜帶的報告基因表達水平，來檢測不同條件下（如添加新冠治療藥物或中和抗體情況下）假病毒對hACE2高表達293T細胞系的感染水平。

參考實驗步驟

1．將高表達hACE2的293T細胞接種在培養板中，接種細胞密度40%左右，37℃，5%CO₂培養箱中過夜培養。
2．感染前1小時更換含polybrene培養基，然后將不同稀釋比的待測樣本（如可能含中和抗體血清樣本，或純的中和抗體或待測藥物）與SARS-CoV-2假病毒混合均勻，37℃作用1h。

細胞實驗假病毒建議用量

3.將步驟2混合物加入到細胞培養基中并混勻，24小時后更換含有抗生素的新鮮培養基。
4.假病毒感染72小時后，測定熒光素酶表達水平（試劑盒另行訂購），根據熒光素酶報告基因表達強度（RLU）計算并確定病毒感染水平。
5.假病毒同時攜帶Puromycin的抗性基因，可以對假病毒感染后的細胞進行抗生素篩選，利用克隆形成率反映病毒感染水平。